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严打违法非瘟疫苗!官方:严格执行“五拦阻”

2020年08月27日 10:26

   农业乡村部办公厅关于进一步严厉打击违法研制临盆谋略运用非洲猪瘟疫苗行为的告诉

 

  各省、自治区、直辖市农业乡村(农牧、畜牧兽医)厅(事务署、委),新疆临盆扶植兵团农业乡村事务署:

  截至目前,包括中国正正在内的天下各国均未批准临盆谋略运用非洲猪瘟商品化疫苗,但非法运用非洲猪瘟疫苗问题时有反映。为切实推动非洲猪瘟防控工作有序开展,保持生猪临盆恢复向好势头,现就严厉打击违法研制临盆谋略运用非洲猪瘟疫苗行为相干事项告诉如下。

   一、严厉打击违法研制非洲猪瘟疫苗行为

  各省级畜牧兽医主管限制要组织对辖区内科研教育单位、企业等所有兽医执行室开展排查活动,浸心反省是否违法从事非洲猪瘟疫苗研制活动;对执行室冰箱保存的无标签疫苗、病料或成份不明的试剂,要开展反省检测确认;对执行活动记录等要进行把稳核查。如发现有非洲猪瘟疫苗制苗用种毒或试制疫苗,要进一步核实种毒和试制疫苗的运用和去向情况。如发现涉嫌违法制售非洲猪瘟疫苗线索,要立即立案查处,依照《兽药牵制条例》《病原微生物执行室生物幽静牵制条例》从严从快从浸治理;涉嫌犯罪的,依法移送公安组织追究刑事任务。要增强对非洲猪瘟疫苗执行室研究、临床试验单位和中试临盆企业监督反省,浸心反省开展非洲猪瘟疫苗研究的执行室前提是否符合要求,执行活动、临床试验等是否经过审批,临床试验范围等是否与批准的试验方案相同,中试前提和生物幽静防范措施是否符合要求,是否存正正在非法转移中试产物及其种毒行为等。发现未经批准、私自开展非洲猪瘟疫苗相干执行室研究活动、临床试验或非法转移中试产物及其种毒的,要立案查处,并依照《兽药牵制条例》《病原微生物执行室生物幽静牵制条例》从严从快从浸处罚。

  二、严厉打击违法临盆非洲猪瘟疫苗行为

   各省级畜牧兽医主管限制要组织对辖区内兽用生物成品临盆企业开展全面反省,排查是否存正正在违法制售非洲猪瘟疫苗行为。浸心反省临盆企业的隐蔽场所、原材料出入库情况、试验动物置办和运用情况、资金往来情况等,全面查找非法制售假疫苗线索。如发现违法制售非洲猪瘟疫苗行为,要进一步核查疫苗临盆出售数量和出售对象、临盆种毒来源等信歇,并依照《兽药牵制条例》第五十六条法则和《兽药严浸违法行为从浸处罚情形》从严从快从浸治理,吊销《兽药临盆允许证》,兽药临盆企业浸要负责人和直接负责的主管人员终身不得从事兽药临盆活动。涉嫌犯罪的,实时依法移送公安组织追究刑事任务。

   三、严厉打击违法谋略非洲猪瘟疫苗行为

   各省级畜牧兽医主管限制要组织对辖区内兽药谋略企业开展全面反省,排查是否存正正在谋略所谓“非洲猪瘟中试苗、自家苗、进口苗”等非法疫苗行为。浸心反省无标签疫苗、出入库记录、资金往来等情况,全面查找违法谋略假疫苗线索。如发现违法谋略非洲猪瘟疫苗行为,要进一步核查假疫苗来源、出售对象和数量等信歇,并依照《兽药牵制条例》第五十六条法则和《兽药严浸违法行为从浸处罚情形》从严从快从浸治理,吊销《兽药谋略允许证》,兽药谋略企业浸要负责人和直接负责的主管人员终身不得从事兽药谋略活动。涉嫌犯罪的,实时依法移送公安组织追究刑事任务。

   四、严厉打击违法运用非洲猪瘟疫苗行为

  各省级畜牧兽医主管限制要组织对辖区内生猪养殖企业(场、户)开展反省,排查是否存正正在违法运用非洲猪瘟疫苗行为。浸心反省冰箱冰柜是否保存有可疑疫苗、疫苗置办记录、免疫接种记录、检测记录、资金往来等信歇,全面查找违法运用假疫苗线索。如发现违法运用非洲猪瘟疫苗行为,要进一步核查假疫苗来源和数量等信歇,并依据《兽药牵制条例》第六十二条和《兽药严浸违法行为从浸处罚情形》从严从快从浸处罚。必要时商请公安组织联合办案,一查到底。对养殖企业(场、户)运用非洲猪瘟非法疫苗免疫接种的猪只,一经检测为阳性的,视为非洲猪瘟感染猪,予以扑杀,并不得给予补贴。

   五、组织开展非洲猪瘟疫苗毒识别检测

  各省级畜牧兽医主管限制正正在遵照《2020年全国非洲猪瘟监测方案》组织做好辖区内非洲猪瘟监测基础上,要组织开展识别检测,对来自养殖场、采用实时荧光PCR方法检测结果为阳性的组织、血液或口鼻拭子等样品,可遵照“非洲猪瘟病毒流行株与基因缺失株识别检测规范”(睹附件)进行识别检测。识别检测结果显现为基因缺失病毒的,各检测单位要第临时间将检测结果及样品来源信歇报省级畜牧兽医主管限制。对涉嫌违法单位,省级畜牧兽医主管限制要立即组织立案查处。

  中国动物疫病预防控制中心和中国动物卫生流行病学中心正正在开展非洲猪瘟病毒监测的同时,要对来自养殖场、采用实时荧光PCR方法检测结果为阳性的组织、血液或口鼻拭子等样品进行识别检测。识别检测结果显现为基因缺失病毒的,第临时间将检测结果及样品来源信歇报我部畜牧兽医事务署。

  六、严格执行非洲猪瘟疫苗“五拦阻”羁系措施

  非洲猪瘟疫苗羁系工作对非洲猪瘟疫情防控和生猪临盆恢复影响永久,给与强力措施、坚决遏止非法研制临盆谋略运用非洲猪瘟疫苗行为是目前各地畜牧兽医主管限制面临的遑急任务。为保证非洲猪瘟疫苗羁系职责落实到位,各地畜牧兽医主管限制和相干从业人员要严格执行非洲猪瘟疫苗“五拦阻”羁系措施,即:拦阻未经批准开展执行活动,拦阻未经审批开展临床试验,拦阻临盆非法疫苗,拦阻谋略非法疫苗,拦阻运用非法疫苗。对存正正在违法研制临盆谋略非洲猪瘟疫苗行为的单位及其浸要负责人、直接负责的主管人员,一经查实,全部列入失信惩戒名单,列为浸心羁系对象,从严审核行政允许审批事项。

   各省级畜牧兽医主管限制要实时总结打击违法研制临盆谋略运用非洲猪瘟疫苗行为进展情况,并于11月30日前将相干工作情况报送我部畜牧兽医事务署。

  附件:非洲猪瘟病毒流行株与基因缺失株识别检测规范

  附件

  非洲猪瘟病毒流行株与基因缺失株识别检测规范

   本规范适用于非洲猪瘟病毒流行毒株与非洲猪瘟病毒CD2v和MGF 360-505R基因缺失株的荧光PCR方法识别检测。

  1. 浸要试剂

   1.1 核酸提取试剂盒。

  1.2 无核酸酶水。

  1.3 荧光PCR预混液(2×)。

  1.4 引物和探针:P72、CD2v、MGF360-505R基因扩增引物和探针由国家非洲猪瘟参考执行室陈设并提供(联系人:李林,电话:0532-87839188)。

   1.5 阳性和阴性对照:阳性对仿效品为ASFV基因组DNA标准物质(用无核酸酶水稀释1000倍后运用),由国家非洲猪瘟参考执行室提供;阴性对仿效品为无核酸酶水。

   2. 浸要仪器竖立

  2.1 荧光PCR扩增仪。

  2.2 台式低温高速离心绪。

  2.3 组织匀浆机。

   2.4 微量可调移液器(2.5 μL、10 μL、100 μL、200 μL、1000 μL等折柳规格)。

   2.5 无核酸酶离心管与吸头。

   2.6 PCR扩增管。

  3. 样品收罗和运输保存

  对活猪,可收罗抗凝全血(EDTA抗凝)、口鼻拭子或血清等;对病死猪或已屠宰猪,可收罗脾脏、淋通同、扁桃体、肝脏等组织。尽快送至执行室进行病毒核酸检测。

   样品的运送与保存应满足NY/T 541《兽医诊断样品收罗、保存与运输技术规范》相干要求。上述样品可正正在4°C最长保存2天;如需长时间保存,应置于-20°C以下。

  4. 样品治理

  4.1 组织样品

  取0.1 g~0.2 g样品,加入1 mL~2 mL预冷的PBS(pH 7.4),用组织匀浆机高速匀浆,制成10%组织匀浆液,以5000 r/min离心10 min,取200 μL上清液进行核酸提取。

  4.2 液体样品

   抗凝全血、血清等液体样品不需进行特殊治理,直接取200 μL进行核酸提取。

   5. 病毒核酸的提取和纯化

  取已进行前治理的样品200 μL,可按传统方法提取病毒核酸,也可采用病毒核酸提取试剂盒、自动化核酸提取仪提取病毒核酸。提取后的病毒核酸应立即运用或置于-20°C以下冷冻保存。每次抽提核酸,应包括一个阳性对仿效品和一个阴性对仿效品。

   6. 荧光PCR检测

   6.1 荧光PCR反应液制备

   正正在灭菌的离心管中制备符合检测样品数量(包括阳性、阴性对照)要求的荧光PCR反应混合液,最少分外制备两个样品的量。每个样品配制20 µL PCR反应混合液,组成如下:7.5 mL P72、CD2v、MGF360-505R基因引物、探针预混液(P72、CD2v、MGF360-505R基因探针分别用FAM、VIC和Cy5进行标志)、12.5 mL 2×探针法荧光PCR预混液。

  分别取20 µL PCR反应混合液加至每个PCR扩增管中;再分别取5 µL DNA模板加入到PCR扩增管中。每次进行荧光PCR扩增时均应设立阳性、阴性对照。阳性对照运用阳性对仿效品所提取核酸作为模板,阴性对照运用阴性对仿效品所提取核酸作为模板。加入模板后,密封PCR扩增管,瞬时离心。将所有PCR扩增管放正正在荧光PCR仪中。按下述前提运行扩增程序。

  6.2 荧光PCR扩增前提

   50°C孵育2min;95°C预变性5min;95°C变性15s,60°C退火延伸1min,45个循环,正正在每一循环的60°C时征采FAM、VIC和Cy5通途中的荧光信号。

  6.3 结果分解

  Ct值由荧光PCR仪的软件自动确定。

  6.3.1 试验竖立前提

  阳性对照P72、CD2v、MGF 360-505R基因的Ct值均<35且显现特异性扩增弧线,阴性对照P72、CD2v、MGF 360-505R基因无Ct值或阴性对照P72、CD2v、MGF 360-505R基因Ct值≥40且无特异性扩增弧线,判为试验有效。试验无效时应浸新进行试验。

   6.3.2 P72、CD2v、MGF 360-505R基因检测结果判定

   6.3.2.1 P72基因检测结果判定(FAM通途)

   被检样品Ct值≤38且显现特异性扩增弧线,判为ASFV P72基因检测阳性;无Ct值或Ct值≥40,判为ASFV P72基因检测阴性;38

  6.3.2.2 CD2v基因检测结果判定(VIC通途)

  被检样品Ct值≤38且显现特异性扩增弧线,判为ASFV CD2v基因检测阳性;无Ct值或Ct值≥40,判为ASFV CD2v基因检测阴性;38

  6.3.2.3 MGF 360-505R基因检测结果判定(Cy5通途)

   被检样品Ct值≤38且显现特异性扩增弧线,判为ASFV MGF 360-505R基因检测阳性;无Ct值或Ct值≥40,判为ASFV MGF 360-505R基因检测阴性;当38

  6.3.3 归纳判定

  结合P72、CD2v、MGF 360-505R等3个基因的检测结果进行归纳判定。举座判定标准睹附表。

  附表 归纳判定标准

  注:“+”代表检测阳性;“-”代表检测阴性

归纳判定结果 检测结果
P72-FAM CD2v-VIC MGF-Cy5
ASFV流行株阳性 + + +
ASFV CD2v基因缺失株阳性 + - +
ASFV MGF基因缺失株阳性 + + -
ASFV CD2v与MGF基因双缺失株阳性 + - -
ASFV阴性 - - -

  农业乡村部办公厅

  2020年8月24日

   抄送单位:中国动物疫病预防控制中心、中国兽医药品监察所、中国动物卫生与流行病学中心

     (文章来源:农业乡村部)


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